生物大分子检测 华微检测

虽然技术种类繁多、手段层出不穷，但对而言，如何正确选择、利用病原微生物检测方法、正确解读检测结果，才是诊治中的关键。所有对病原微生物检测结果的解读都应基于患者、基于。
病原微生物检测——分子生物学与*学相结合的方法：
1、*PCR：
*PCR(immuno polymerase chain reaction，IM PCR)是1992年Sano等[16]建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术。该技术把抗原抗体反应的高特和聚合酶链反应的高敏感性**结合起来，它的基本原理是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针，用此探针与待测抗原反应，PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子，电泳定性，根据特PCR产物的有无，来判断待测抗原是否存在。目前，国内外报道的*PCR的敏感性一般比现行的EL ISA法高102～105倍。由于PCR产物在抗原量未达到饱和前与抗原抗体复合物的量成正比，因此*PCR还可用于抗原的半定量试验。
2、PCR2EL ISA：
PCR2EL ISA法是PCR与EL ISA技术结合的检测方法。其综合了PCR，分子杂交，和EL ISA 3种技术的优点。主要用于检测样品中的特定基因。它引入(或生物素)标记的dN TP或引物进行PCR扩增，利用酶标抗抗体(或酶标记亲和素)进行EL ISA检测，代替了用于常规PCR产物检测的电泳方法，方便快捷，易于处理大量样品，且其灵敏度比使用琼脂糖凝胶电泳检测方法高100倍，当有适当的标准品时，还可进行定量测定。

病原微生物检测——生化方法：
生化方法检测病原微生物实际上是测定微生物特酶。由于各种微生物所具有的酶系统不完全相同，对许多物质的分解能力亦不一致。因此可利用不同底物产生的不同代谢产物来间接检测该微生物内酶的有无，从而达到检测特定微生物的目的。如沙门氏菌能产生辛酯酶，这一性能是除沙门氏菌外的各属肠杆菌科所不具备的。该方法是以42甲基伞形酮辛酯(MUCAP)为底物，经沙门氏菌的酶降解后，释放出4MU，在紫外灯下观察其发出的蓝色荧光。该方法简便易行，从加入底物到紫外灯下观察到出结果仅需几分钟即可完成。其灵敏度和特分别可达95%和90%。对与H2 S(+)反应的沙门氏菌该法更为敏感，灵敏度和特均接近。大肠埃希氏菌具β2葡萄糖醛酸酶，但以O157:H7为代表的肠性大肠埃希氏菌(EHEC)却不具此酶，故β2葡萄糖醛酸酶阴性已成为初步筛查EHEC的重要特征。白色具脯氨酸肽酶及N2已酰β2D半乳糖苷酶，分别以合适的试剂检测，两酶均阳性即为白色。

病原微生物检测——蛋白质指纹图谱技术：
蛋白质指纹图谱技术是随着蛋白质组学兴起的一种新技术，用于各种疾病特蛋白指纹的识别和判断，可以直接检测不经处理的尿液、血液或细胞裂解液等。人体血清里有成千上万个蛋白，人一旦发生了某种疾病，蛋白质成分就必然会起变化。该技术不是利用单的蛋白质峰的出现和消失来判断SARS，而是用5个蛋白质峰的出现和消失来判断，好比刑侦破案中甄别5个手指的指纹，故此称为“指纹图谱”。质谱仪通过复杂的计算能够记住SARS病人血清里蛋白质的图谱，通过对质谱仪的“训练”之后，它就能够根据人体血清中的特异变化，灵敏地辨别出测试的对象是否感染了SARS病毒。
这种检测方法经过检测，阳性率接近95%，特将近96%，能在病人发烧的天即可以得出满意的检测结果。只需要一滴血，将采集到的病人血样现场直接放到9mol浓度的尿素里，病毒可以*溶解灭活，这样在一般医院的化验室里即可实现安全操作，从而防止交叉感染。有称蛋白质指纹图谱技术标志着一种划时代的诊断模式的诞生。

病原微生物检测——传感器技术和分子诊断技术相结合：
生物传感器是将新兴的传感器技术和分子诊断技术相结合而成的一种新技术，是现代诊断发展的一个新方向。生物传感器包含两部分，即分子识别器件和换能器。在待测物、识别器件以及转换器件之间由一些生物、化学、生化作用或物理作用过程彼此联系。由于生物传感器检测准确、操作简便等特点，近年来已经在许多领域取得了很大的进展，在生物分子相互作用、药物筛选、诊断、食物检测等领域获得了广泛的应用。其中中用于病原体检测的以DNA生物传感器为常见。尽管生物传感器作为一种新的传感元件近年来得到了很大的发展，许多光化学、电化学以及压电晶体都相继在生物传感器中得到应用。与常规的核酸和蛋白质检测相比，具有检测准确、操作简单等特点，但由于它存在灵敏度不够、*受杂质干扰等缺点，随着研究的进一步深化和技术方法的改进，这些问题将会得到解决。
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